?繪制銅綠假單胞菌生長曲線【檢測步驟】
用一次性接種環(huán)挑取一環(huán)實驗室保存銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（編號ATCC 9027）污染自超市采購的經(jīng)檢測無菌落生長的5 L裝包裝飲用水（同一批次購買2瓶），在20℃下放置30 d，且在放置過程中，在其生長曲線的穩(wěn)定期，吸取1 mL加入至另一瓶包裝飲用水中，在4℃下放置35 d（在污染之前，每桶水分別取500 mL在各個溫度下放置，留作空白對照），根據(jù)其在水中的銅綠假單胞菌的菌落數(shù)變化繪制生長曲線。
（1）標(biāo)準(zhǔn)菌株活化。將保存于-70℃超低溫冰箱的銅綠假單胞菌標(biāo)準(zhǔn)菌株磁珠管取出放入4℃冰箱，讓其磁珠溫度升高。提前制備營養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基，在超凈工作臺下完成以下步驟：用接種針挑取磁珠，在營養(yǎng)瓊脂上劃線，36℃下培養(yǎng)24 h。待營養(yǎng)瓊脂上生長出銅綠假單胞菌單菌落后，開始下一步驟。
（2）操作步驟及培養(yǎng)。不同溫度下保的試驗樣品，每間隔一段時間，從中吸取1 mL加入無菌培養(yǎng)皿中，倒入已滅菌的假單胞菌瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基/CN瓊脂，然后在36℃下培養(yǎng)48 h，然后計數(shù)，繪制生長曲線。
20℃下銅綠假單胞菌生長曲線圖如圖1所示。由圖1可知，銅綠假單胞菌生長穩(wěn)定期在第4～6 d。在其菌生長的穩(wěn)定期，吸取1 mL加入包裝飲用水中，4℃下放置35 d，其試驗樣品結(jié)果生長曲線如圖2所示。
圖1 20℃銅綠假單胞菌生長曲線圖
圖2 4℃放置35 d銅綠假單胞菌生長曲線圖
由試驗結(jié)果可知，銅綠假單胞菌對于生長環(huán)境要求不高，但其對溫度特別敏感。在20℃下，其生長曲線包含細菌的4個生長時期：遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。其穩(wěn)定期為放置的第4～6 d，此期間其菌落數(shù)無變化，無其他干預(yù)手段，整個生長周期在30 d左右。但在4℃下，該菌基本不生長，菌落數(shù)一直呈現(xiàn)下降趨勢，這也可以解釋在冬天溫度較低時，部分包裝飲用水企業(yè)銅綠假單胞菌檢出率不高的現(xiàn)象。
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