水體毒性的檢測方法與操作步驟
隨著人們的生產(chǎn)生活，大量的化學(xué)品進(jìn)入水體，成為水體污染的主要污染源，這些污染物會(huì)對水體中的生物造成影響，同時(shí)也會(huì)危害到人體的健康，因此，對水體毒性進(jìn)行檢測及監(jiān)測是評價(jià)水體是否收到污染以及判斷污染程度的重要手段。
在水體毒性的檢測方法中，生物檢測具有結(jié)果直觀的顯著優(yōu)勢，而被廣泛應(yīng)用。其中，慢性細(xì)胞毒性檢測方法通過將濃縮有機(jī)物暴露在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中培養(yǎng)72小時(shí)，對其慢性細(xì)胞毒性特性進(jìn)行分析，根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)生成每個(gè)細(xì)胞毒性濃度響應(yīng)曲線，對曲線進(jìn)行回歸分析計(jì)算出細(xì)胞密度降低50％相關(guān)的濃度因子(LC50)，以LC50作為衡量毒性大小的參數(shù)。但是，慢性細(xì)胞毒性檢測方法需要將同種水樣的濃縮有機(jī)物按從低到高的濃度暴露在細(xì)胞中培養(yǎng)72小時(shí)，消耗實(shí)驗(yàn)細(xì)胞多，耗時(shí)可達(dá)數(shù)日，很難滿足對多組水樣毒性強(qiáng)度大小的快速檢測要求，生產(chǎn)效率較低。
因此，開發(fā)一種簡便且快速的水體毒性檢測方法具有重要意義。
這種水體毒性的檢測方法，包括以下步驟：
(1)測定待測水樣中的總有機(jī)碳濃度，酸化，濃縮，得濃縮后有機(jī)物；
(2)將步驟(1)所得濃縮后有機(jī)物加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，測定培養(yǎng)過程中的細(xì)胞存活率；當(dāng)所述待測水樣中的總有機(jī)碳濃度≥5mg/L時(shí)，所述細(xì)胞培養(yǎng)液中，所述濃縮后有機(jī)物的濃度為待測水樣中的總有機(jī)碳濃度的100-150倍；當(dāng)所述待測水樣中的總有機(jī)碳濃度＜5mg/L時(shí)，所述細(xì)胞培養(yǎng)液中，所述濃縮后有機(jī)物的濃度為待測水樣中的總有機(jī)碳濃度的400-600倍；
(3)用Logistics函數(shù)擬合，得到細(xì)胞存活率與培養(yǎng)時(shí)間的擬合曲線，通過擬合曲線上驟降段的下降高度，評估待測水樣毒性。
本檢測方法以高濃度暴露為手段，將高濃度的有機(jī)物加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中，能夠在短時(shí)間內(nèi)觀察到細(xì)胞的衰亡，從而實(shí)現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)量化細(xì)胞死亡率，以細(xì)胞存活率為縱軸、培養(yǎng)時(shí)間為橫軸作散點(diǎn)圖，通過Logistics對細(xì)胞生長曲線進(jìn)行擬合，通過擬合曲線上驟降段的下降高度，評估水樣毒性，下降高度越大，毒性越強(qiáng)，并且可以以此來比較不同水體的毒性強(qiáng)弱。
若水樣總有機(jī)碳濃度較低(＆lt;5mg/L)，則選擇原水濃縮倍數(shù)較高(400倍-600倍)的濃縮有機(jī)物；若水樣總有機(jī)碳濃度較高(≥5mg/L)，則選擇原水濃縮倍數(shù)較低(100倍-150倍)的濃縮有機(jī)物。以上參數(shù)的選擇，是經(jīng)過多次預(yù)實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)出能使細(xì)胞在較短時(shí)間衰亡的有機(jī)物濃縮倍數(shù)。所檢測的水體毒性大小排序與傳統(tǒng)慢性哺乳動(dòng)物毒性試驗(yàn)結(jié)果一致，表明水體毒性檢測方法具有一定準(zhǔn)確性，并且此方法可以在9小時(shí)內(nèi)完成曲線擬合，更加快速高效，能夠?qū)z測時(shí)間縮短，較快地比較水樣毒性大小，解決傳統(tǒng)慢性細(xì)胞毒性方法耗時(shí)長的弊端，提高生產(chǎn)效率。
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