鈍葉獨行菜中抗癌成分的分離及制備方法
鈍葉獨行菜多生長于海拔1600m～1800m的草地、田邊、戈壁灘、平地和山坡，在我國西北地區分布較廣，其中以甘肅、青海、新疆分布最為廣泛，中亞和蒙古亦有分布。
獨行菜屬植物化學成分主要是：生物堿、黃酮類、揮發油、芥子油苷、酚酸類、脂肪酸、木質素等。
目前并沒有針對鈍葉獨行菜用于抗癌成分的研究，也沒有公開具體的獨行菜中抗癌成分的分離制備方法。
針對現有技術的不足，技術人員研發了一種鈍葉獨行菜中抗癌成分的分離及制備方法，以解決上述的問題。
鈍葉獨行菜中抗癌成分的分離及制備方法包括以下步驟：
步驟一、準備原料，鈍葉獨行菜干樣研磨成粉末備用；
步驟二、回流提取，按重量稱取鈍葉獨行菜粉末，通過95％乙醇進行超聲回流提取，得到浸膏；
步驟三、減壓濃縮，將步驟二的浸膏經乙酸乙酯萃取，分別收集乙酸乙酯相和水相，再對各相進行減壓濃縮，揮干溶劑，得到乙酸乙酯部位浸膏和水相部位浸膏；
步驟四、梯度洗脫，將水相部位的浸膏用純水超聲至充分溶解后，以1BV/h流速上樣，充分吸附12h后，依次用純水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、95％乙醇以0.5BV/h洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮各洗脫液，揮干溶劑后，得到6個組分；用95％乙醇將乙酸乙酯部位浸膏溶解后與相等質量的硅膠攪拌，干法裝柱，在柱高達到要求后，將制好的硅膠樣品均勻放入玻璃層析柱內，依次用氯仿、氯仿-甲醇(50:1)、氯仿-甲醇(30:1)、氯仿-甲醇(20:1)、氯仿-甲醇(10:1)、氯仿-甲醇(5:1)、氯仿-甲醇(2:1)、甲醇，進行梯度洗脫，分段收集，收集濃縮液后揮干溶劑，得到18個組分；
步驟五、活性成分篩選分離，通過癌細胞生長曲線測定；組分體外抗癌細胞活性篩選，確定活性組分鈍葉獨行菜乙醇提取物、乙酸乙酯部位、氯仿-甲醇(50:1)I、氯仿-甲醇(50:1)II；從活性組分中分離出香草酸、丁香酸、對羥基苯甲酸乙酯和異香草酸。
水相部位的浸膏經大孔樹脂乙醇-水梯度洗脫后共獲得6個組分，分別是純水組分、20％乙醇組分、40％乙醇組分、60％乙醇組分、80％乙醇組分、95％乙醇組分；
乙酸乙酯部位浸膏過硅膠經氯仿-甲醇梯度洗脫后共獲得18個組分，分別是氯仿-甲醇(50:1)I組分、氯仿-甲醇(50:1)II組分、氯仿-甲醇(30:1)I組分、氯仿-甲醇(30:1)II組分、氯仿-甲醇(30:1)III組分、氯仿-甲醇(20:1)I組分、氯仿-甲醇(20:1)II組分、氯仿-甲醇(20:1)III組分、氯仿-甲醇(10:1)I組分、氯仿-甲醇(10:1)II組分、氯仿-甲醇(10:1)III組分、氯仿-甲醇(5:1)I組分、氯仿-甲醇(5:1)II組分、氯仿-甲醇(5:1)III組分、氯仿-甲醇(2:1)I組分、氯仿-甲醇(2:1)II組分、甲醇I組分、甲醇II組分。
小結
鈍葉獨行菜中抗癌成分香草酸、丁香酸、對羥基苯甲酸乙酯和異香草酸，可抑制癌細胞生長，通過分離制備，得到的化合物純度較高。
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