臨床微生物實驗室藥敏試驗三種擴散法的具體操作及試驗結果（二）
2結果觀察
運用擴散法進行藥敏試驗，結果顯示如下表。
藥物敏感試驗判定標準參考表1，氧氟沙星（編號為1）、氟甲喹（編號為4）、新霉素（編號為5）；在20 mm以上均為高敏；硫氰酸紅霉素（編號為2）、林可霉素（編號為3）在10～14 mm均為中敏。
表2藥物敏感試驗結果
3結論與體會
3.1結論
通過紙片法、牛津杯法和打孔法對大腸桿菌的藥敏試驗，可得出以下結論：
打孔法不需要制作或購買藥敏片，也不用購買牛津杯，成本低，適合生產中應用。打孔法3組對比，結果整齊，誤差小。打孔法直接打孔后，將藥液滴入即可。
由此可見，打孔法操作簡單，成本低，準確率高，適合商品藥敏感度的測定。
3.2影響藥敏試驗的因素
3.2.1培養基
溶解培養基要用蒸餾水，一些離子如Ca2+、Mg2+、Al3+等，一定程度上影響藥敏試驗的結果。
細菌藥敏試驗的培養基厚度大約為4 mm，若培養基厚度大于4 mm，會使細菌出現耐藥；若小于4 mm，本應耐藥的易出現敏感，這一點很關鍵。
3.2.2試紙片的影響
藥敏試紙片的試紙一般是使用加厚型的濾紙，藥敏紙片的厚度要求大約1 mm，這樣才有利于細菌的生長和藥物的擴散速度。藥敏紙片的直徑在6.00～6.35 mm之間，紙片的厚度和直徑大小都會影響藥敏試驗的結果。
做好的紙片應放低溫下（-10℃）保存，同時要避免潮濕，以保持抗菌藥物的活性。盛紙片小瓶自低溫處取出應在室溫平衡至少10min后再打開，避免冷凝水影響藥效。
3.2.3細菌菌株的影響
由于各種菌對藥物的敏感性不同，產生的抑菌環大小不同，如果菌種不純，試驗中所產生的抑菌環大小與該菌種在純培養狀態下產生的抑菌環大小存在較大的差異，影響判斷結果的準確性。因此需要對各種致病菌提純后，分別進行不同的藥敏試驗。藥敏試驗時，需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標準是要求菌液濃度在1.5億/mL左右。若菌液濃度過高，該菌會對所有藥物產生耐藥；反之，菌液濃度過低，該菌會對所有藥物均敏感。
藥敏試驗中要將菌液均勻地涂在培養基上，使細菌均勻分布，這樣才能使試驗結果不會出現較大的偏差。涂菌后15 min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后，細菌要有一段時間的適應過程，但是時間不能過長，否則會使細菌產生耐藥。貼藥敏紙片時，每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口，避免藥敏紙片之間相互混淆，以提高藥敏的準確性。藥物殺滅細菌存在一定的量比，藥敏試驗培養基上細菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。
3.2.4培養時間的影響
一般培養溫度和時間為37℃8～18h，有些抗菌藥擴散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養基，先置4℃冰箱內2～4 h，使抗菌藥預擴散，然后再放37℃溫箱中培養，可以推遲細菌的生長，而得到較大的抑菌圈。
3.3藥敏試驗的應用
藥物敏感試驗后，應選擇高敏藥物進行治療，也可選用兩種藥物協助使用，以減少耐藥菌株。在選擇高敏藥物時應考慮藥物的吸收途徑，因為我們藥敏實驗是藥液直接和細菌接觸，而在給畜禽用藥的時候，必須通過機體的吸收才能使藥物達到一定的效果，所以在給畜禽用藥時，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會達到好的治療效果。
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