怎么知道護(hù)手霜菌落總數(shù)有沒有超標(biāo)【實(shí)驗(yàn)】
檢測(cè)化妝品菌落總數(shù)時(shí)，為使菌落在培養(yǎng)基中清晰可辨，允許在卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中添加2，3，5-三苯基氯化四氮唑（以下簡(jiǎn)稱TTC）。文章以護(hù)手霜為樣品基質(zhì)，分別加入適當(dāng)菌含量的大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、酵母工作菌懸液，制備5mg/100mL濃度的TTC卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂，同時(shí)以不添加TTC卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行驗(yàn)證，以營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作為對(duì)照，對(duì)菌落計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。結(jié)論：添加了5mg/100mLTTC的培養(yǎng)基用于化妝品菌落總數(shù)檢測(cè)時(shí)對(duì)G+有明顯的抑制作用，建議在日常檢測(cè)過程中需慎重選擇。
化妝品中富含脂肪、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成分，是微生物良好的碳源和氮源，為微生物的生長(zhǎng)、繁殖提供了良好的條件。菌落總數(shù)是判定化妝品被污染程度的標(biāo)志，在實(shí)際工作中，乳膏狀樣品常因檢驗(yàn)樣品含有沉渣給菌落鑒別造成一定的困難。為了有利于菌落計(jì)數(shù)，在培養(yǎng)基中加入適量的TTC，它能被細(xì)菌還原成為紅色物質(zhì)使菌落呈紅色[1]，目前化妝品的微生物學(xué)質(zhì)量及檢驗(yàn)方法依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015版），菌落總數(shù)的檢驗(yàn)所用培養(yǎng)基為卵磷脂、吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在必要時(shí)可以使用5mg/100mL TTC[2]。該濃度TTC對(duì)化妝品菌落總數(shù)測(cè)定是否有影響，文章通過實(shí)驗(yàn)做一些探討。
1材料與方法
1.1培養(yǎng)基
5mg/100mL TTC卵磷脂吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷脂吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；營(yíng)養(yǎng)瓊脂：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；滅菌生理鹽水：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
1.2樣品
護(hù)手霜：淘寶。
1.3菌種
金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希氏菌ATCC25922、酵母ATCC9763、蠟樣芽孢桿菌ATCC11778，以上菌種均由北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司提供。
1.4儀器
高壓滅菌器：日本HIRAYAMA；恒溫培養(yǎng)箱：微生物快速立體計(jì)數(shù)儀，BioSense；上海一恒科技有限公司；冰箱：海爾集團(tuán)
2方法
2.1菌液的制備
分別接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、酵母、蠟樣芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10mL營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，36℃培養(yǎng)24h，上述培養(yǎng)物用無菌生理鹽水度稀釋，制成每1mL含菌量在30～300CFU的菌懸液。菌液制備后，保存在2～8℃，在24h內(nèi)使用。
2.2供試液的制備
取10g護(hù)手霜加入到裝有玻璃珠及90mL滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振蕩制成1：10供試液。
2.3實(shí)驗(yàn)方法
2.3.1菌液試驗(yàn)
分別取2.1中的菌液2mL，分別注入兩個(gè)平皿中，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測(cè)定菌液中的菌落數(shù)。
2.3.2樣品對(duì)照試驗(yàn)
取2.2中的1：10供試液2mL，分別注入兩個(gè)平皿中，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測(cè)定樣品中的菌落數(shù)。
2.3.3驗(yàn)證試驗(yàn)
取2.2中的1：10供試液1mL和2.1中的菌液1mL分別注入同一平皿中，同時(shí)做平行，加入培養(yǎng)基，于36℃培養(yǎng)48h，測(cè)定菌落數(shù)。
3結(jié)果與討論
表1結(jié)果表明5mg/100mL TT C對(duì)革蘭氏陰性桿菌的生長(zhǎng)繁殖無影響，但對(duì)革蘭氏陽性葡萄球菌有較強(qiáng)的抑制作用，結(jié)果顯示無細(xì)菌生長(zhǎng)。酵母在36℃生長(zhǎng)較差，且不顯色[3]。在實(shí)際工作中，菌落計(jì)數(shù)選擇在30～300CFU之間，菌落容易計(jì)數(shù)，沒必要加入TTC，減少TTC對(duì)細(xì)菌的毒性。如果遇到樣品含較多顆粒，需要添加TTC時(shí)可以參考陳得云[4]等試驗(yàn)在每100mL培養(yǎng)基加入TTC濃度2～3mg，可使多數(shù)菌落顯色且不抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。
4結(jié)論
應(yīng)用TTC指示劑在化妝品菌落總數(shù)測(cè)定，便于區(qū)別化妝品中的顆粒與細(xì)菌，結(jié)果易于觀察，計(jì)數(shù)快速準(zhǔn)確。《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015版）中用5mg/100mL濃度的TTC在試驗(yàn)中菌落均能顯色（酵母除外），但對(duì)金黃色葡萄球及蠟樣芽胞桿菌有較強(qiáng)的抑制作用，故在使用TTC進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果誤差。
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