高齡婦女的生育能力下降,LED光照或能改善卵巢功能
新型光源-發(fā)光二極管作為光治療的一種新手段在健康和醫(yī)療中的應用尚處于起步階段,且近年來隨著國內LED芯片技術的快速提高,新型LED光源因壽命長、光譜窄、產熱低、光電轉化率高等優(yōu)勢使其開始被應用于健康和醫(yī)學領域,并且快速發(fā)展。尤其在代謝、心血管、神經、皮膚及免疫系統(tǒng)疾病,LED無創(chuàng)光療對能夠起到防治和輔助性治療的作用,臨床需求巨大。
光療作為一種有效的治療手段,在臨床和工程上正得到越來越廣泛的應用,其理論基礎是生物組織吸收光能并將光能轉化為熱能和化學能,從而導致體內產生一系列的化學反應,這些化學反應包括光致分解、光致氧化、光致聚合和光致敏化,LED作為一種新型光源,隨著光的生物效應逐步被人們所認識,正逐步應用于醫(yī)學中并發(fā)揮積極的作用。
當前女性晚婚晚育趨勢增加,高齡婦女的生育能力下降成為了一個嚴峻的社會和醫(yī)學挑戰(zhàn)。
綜上所述的問題,為此,提出一種窄帶LED光設備及使用該LED光照改善卵巢功能的方法。
窄帶LED光設備的LED光照改善卵巢功能的方法,包括以下步驟:
步驟S1、小鼠選擇和分組:
第一部分選用7月齡C57雌鼠,第二部分選用2月齡C57雌鼠,并將小鼠隨機分為自然光對照組和不同波長LED光照射組,每組6只小鼠,在新環(huán)境中適應一周后將小鼠背部剃毛,確定照射位置并標記;
步驟S2、窄帶LED光設備的組裝,以及設置;
步驟S21、將實驗鼠透明罩505放置入LED光源架501的實驗腔504內部;
步驟S22、將小鼠放置入實驗鼠透明罩505的內部,再通過轉柄508轉動調節(jié)螺桿507推動實驗鼠壓板506移動,使得實驗鼠壓板506將壓力作用于小鼠,將小鼠壓在實驗鼠透明罩505的內部;
步驟S23、在50mw光功率密度下,用不同波長的LED照射燈503LED光照射小鼠5min,連續(xù)照射15天,模擬臨床治療3個療程;
步驟S3、將處理后的雌鼠通過陰道抹片檢測發(fā)情周期;
步驟S4、雌鼠激素測定;
步驟S41、LED光照射結束后,在小鼠處于發(fā)情間期時,對小鼠行眼眶采血,收集到1.5mL離心管中靜置,4℃過夜,3500rmp離心5min,吸取上層血清,-80℃凍存;
步驟S42、用放射免疫法測定血清中檢測血清中促卵泡生成激素(FSH)、促黃體生成激素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睪酮(T)、催乳激素(PRL)、AMH激素水平;
步驟S5、卵巢組織采集和組織學評估;
步驟S51、在取血后,將小鼠安樂處死,取出卵巢組織,一個卵巢凍到-80℃冰箱,另一個卵巢進行固定、包埋和切片處理;
步驟S52、對組織連續(xù)切片后進行染色,對染色的連續(xù)切片進行計數(shù),計數(shù)方法為每五張連續(xù)切片中,隨機選取一張對其中的卵母細胞(DDX4陽性)的數(shù)量進行統(tǒng)計;
步驟S53、將統(tǒng)計結果加和,再乘以校正數(shù)值(5),即為最終的卵巢中各級卵泡數(shù);
步驟S6、基因表達分析:
步驟S61、使用RT-PCR和RNA-seq技術,對實驗組和對照組卵巢組織的總RNA進行基因表達分析;
步驟S62、使用免疫組化染色技術,檢測卵巢組織中標記分子的分布情況;
步驟S7、后代評估:對產下的仔鼠每隔7天進行拍照并觀察其狀態(tài),并每隔7天測量仔鼠的體重,記錄體重數(shù)據(jù)以便繪制生長曲線,以評估仔鼠的生長速度和趨勢;
步驟S8、數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計:對見栓率、懷孕率和產仔數(shù)進行統(tǒng)計學分析,比較實驗組和對照組之間的差異;
陰道栓檢查和配種實驗檢測見栓率、懷孕率;
見栓率=見栓雌鼠/總交配雌鼠
懷孕率=產仔的雌鼠數(shù)/見栓的雌鼠數(shù)。
該設備檢測紅光到紅外波段的窄帶LED光對高齡卵巢功能及受孕能力的影響,數(shù)據(jù)表明630nm LED光,光功率密度為50mW,光照5min可以提高高齡小鼠的受孕能力和平均窩產仔數(shù),提高AMH水平。
該設備檢測紅光到紅外波段的窄帶LED光療在促進損傷子宮內膜和薄型子宮內膜修復方面的作用,結果表明630nm LED光,光功率密度為50mW,光照5min可以修復薄型子宮,使部分小鼠懷孕,但同時該條件下LED光照射可能會有一定程度的副作用,需要進一步篩選合適的LED光波長及光功率密度。
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