Biosense微生物動態監測系統實驗操作步驟——膿腫分枝桿菌的生長曲線
膿腫分枝桿菌是快速生長分枝桿菌(RGM)中最耐藥的細菌之一。它對目前使用的抗生素(包括幾乎所有抗結核藥物)具有天然耐藥性，這嚴重復雜化并限制了治療方案。膿腫分枝桿菌被認為是囊性纖維化患者的重要病原體。細菌素可能是對抗這種感染的替代治療方案，以克服細菌耐藥性的問題。與經典的肉湯稀釋法相比，oCelloScope具有速度快的優點。它可以提供圖像和視頻，并且可以快速篩選抗菌藥物的活性。研究人員可以在6小時內檢測到膿腫分枝桿菌的生長，而不是傳統的在肉湯培養基中連續稀釋3-5天。
實驗方法
1、將oCelloScope置于37°C的標準實驗室培養箱中
2、在37°C的7H10瓊脂培養基中培養膿瘍桿菌參考株或臨床分離株3-5天
3、根據OD600測量值，將McFarland細菌懸浮液配制為0.5。將懸液稀釋1/10到7H9培養基中(添加0.5%甘油和10%OADC)。
4、將細菌懸液添加到含有細菌素的96孔板中
5、將裝有細菌懸浮液的96孔板導入oCelloScope設備中，擰緊并關閉儀器蓋。建議添加到每個孔的菌懸液的總容積為200μL。
6、使用oCelloScope的生長動力學模塊進行AST分析。
7、通過單擊主窗口左上角的“New job”按鈕，配置UniExplorer軟件進行延時分析。
8、為新作業命名，然后按以下順序雙擊(或拖動)圖標，從左側列表中選擇采集模塊:(i)“采集”(用于記錄新圖像數據)和(ii)“生長動力學分析”(用于監測細菌生長/生長抑制的時間)。按“下一個”。
9、通過左鍵單擊從儀器列表中選擇要使用的儀器，讓UniExplorer軟件識別oCelloScope儀器。按“Next”繼續實驗設置。
10、選擇96孔板
11、通過選擇獲取的圖像數量(“重復次數”)和兩個連續圖像之間的時間間隔(“重復間隔”)來調整分析時間。例如，通過選擇“重復次數”=48和“重復間隔時間”=00:30:00,oCelloScope將在24小時內每30分鐘拍攝一次圖像，第一張圖像在t=0時拍攝。
12、用光標選擇并啟用應該包含在分析中的孔。啟用的孔顯示為藍色。
13、按“開始”鍵開始實驗
14、實時生長/生長抑制曲線以及圖像數據和延時視頻可以在“當前掃描”選項卡中檢查和比較實驗期間。
圖1.Biosense微生物動態監測系統
實驗結果
詳細介紹了使用Biosense微生物動監測系統在醫院環境中測試，由初創公司Syngulon(http://syngulon.be)提供的對膿腫分枝桿菌的細菌素和抗菌肽的抗菌活性，并實時監測生長動力學分析的方案。
圖2、采用Biosense微生物動態監測系統中的BCA歸一化算法測量膿腫分枝桿菌生長曲線(三份)
圖3、Biosense微生物動態監測系統捕獲的7h30分鐘時刻對應的膿腫分枝桿菌(粗略表型)生長延時圖(典型蛇形索成像)
圖4、Biosense微生物動態監測系統測試的膿腫分枝桿菌生長曲線
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