優化培養基配方減少無機硒對粗毛纖孔菌的抑制作用，同時提高富硒菌絲的產量（二）
1.2.4菌絲生長情況檢測菌絲生長情況通過菌絲平均生長速度進行評估,利用十字交叉法對培養后平板內粗毛纖孔菌菌絲進行測量,測量所得菌絲生長直徑除以培養時間即為菌絲生長速度,其中菌絲生長直徑為測量獲得總直徑減去初始直徑。最大耐受濃度(MTC)指不引起受試對象出現死亡的最高計量,即當實驗濃度處于最大耐受濃度時,菌絲體有生長;而實驗濃度高于MTC時,則生長被完全抑制。
1.2.5富硒粗毛纖孔菌菌絲硒含量的測定參考食品安全國家標準(GB 5009.268-2016),采用電感耦合等離子體質譜法(ICP-MS),精確稱取富硒粗毛纖孔菌菌絲干試樣0.5 g于聚四氟乙烯消解內罐,加5 mL硝酸浸泡過夜。封好消解罐放入恒溫干燥箱,160℃保持6 h,自然冷卻至室溫后打開加熱趕酸至近干,將消化液吸入25 mL容量瓶中,用少量1%硝酸溶液洗滌內罐和內蓋3次,合并洗液,用1%硝酸定容,混勻備用。將試樣溶液與空白溶液分別注入電感耦合等離子體質譜儀中,測定硒元素含量。
1.3數據處理
利用DPS 7.05軟件對實驗數據進行隨機單因素方差分析,采用Tukey多重比較法進行顯著性檢驗。利用Design-Expert 8.06軟件對響應面實驗進行設計、分析并繪制響應曲面。
2結果與分析
2.1單因素實驗結果
2.1.1硒濃度對粗毛纖孔菌菌絲生長的影響
由圖1可知,粗毛纖孔菌菌絲的生長情況受外源硒影響較大。當培養基中所添加硒濃度≤18.63 mg/L時,粗毛纖孔菌菌絲的生長速度與對照組無顯著性差異(P>0.05)。隨處理濃度的升高,當硒濃度≥37.25 mg/L時,粗毛纖孔菌菌絲生長開始受到明顯的抑制,其生長速度顯著性降低(P<0.05)。當硒濃度達到298 mg/L時,粗毛纖孔菌菌絲略有生長,其生長速度與零生長組(即完全抑制組,硒濃度為596 mg/L)無顯著性差異(P>0.05)。因此,粗毛纖孔菌菌絲對硒的最大耐受濃度為298～596 mg/L,而后續實驗中硒的濃度以18.63 mg/L為宜。
圖1硒濃度對粗毛纖孔菌菌絲生長速度的影響
2.1.2常規培養料對粗毛纖孔菌菌絲生長的影響
由圖2可知,粗毛纖孔菌菌絲在常規培養料配制的培養基上均能生長,但其菌絲生長速度存在顯著性差異(P<0.05),且菌絲稠密度相差較大。粗毛纖孔菌在麩皮培養基上生長效果最好,其菌絲的生長速度可達到6.6 mm/d,且菌絲稠密度最高;其次為改良PDA培養基;以玉米粉、大米、豆粉為培養料時,其菌絲生長速度顯著降低(P<0.05),且菌絲稠密度明顯弱于改良PDA培養基。此外,粗毛纖孔菌菌絲對玉米粉的可利用度最低。因此,后續實驗選取麩皮為培養基。
圖2常規培養料對粗毛纖孔菌菌絲生長速度的影響
注:菌絲的稠密度:+++:CK程度,++++:高于CK程度,++:低于CK程度,+:低于++程度;圖3、圖6同。
2.1.3補充碳源對粗毛纖孔菌菌絲生長的影響如圖3所示,粗毛纖孔菌對不同補充碳源的可利用度不同,以不同類型的補充碳源作為培養基成分,其菌絲生長速度存在顯著性差異(P<0.05),且菌絲稠密度相差較大。當以葡萄糖作為補充碳源時,粗毛纖孔菌菌絲生長速度最高,菌絲稠密度最佳;以蔗糖、果糖、海藻糖作為補充碳源時,其菌絲生長速度稍低,菌絲稠密度則明顯弱于葡萄糖的效果。粗毛纖孔菌菌絲對乳糖的可利用度最低。因此,后續實驗選取葡萄糖作為補充碳源。
圖3補充碳源對粗毛纖孔菌菌絲生長速度的影響
2.1.4 pH對粗毛纖孔菌菌絲生長的影響由圖4可知,當pH條件偏酸時,該粗毛纖孔菌菌絲生長速度偏低;當pH處于6.5～7.5時,該粗毛纖孔菌菌絲生長速度先隨pH的增大而增加,再隨pH的增大而降低,于pH7.0時達到最佳,表明該粗毛纖孔菌菌株在中性pH條件下長勢最好。因此,后續實驗中pH條件以7.0為宜。
圖4 pH對粗毛纖孔菌菌絲生長速度的影響
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