優(yōu)化培養(yǎng)基配方減少無(wú)機(jī)硒對(duì)粗毛纖孔菌的抑制作用，同時(shí)提高富硒菌絲的產(chǎn)量（二）
1.2.4菌絲生長(zhǎng)情況檢測(cè)菌絲生長(zhǎng)情況通過(guò)菌絲平均生長(zhǎng)速度進(jìn)行評(píng)估,利用十字交叉法對(duì)培養(yǎng)后平板內(nèi)粗毛纖孔菌菌絲進(jìn)行測(cè)量,測(cè)量所得菌絲生長(zhǎng)直徑除以培養(yǎng)時(shí)間即為菌絲生長(zhǎng)速度,其中菌絲生長(zhǎng)直徑為測(cè)量獲得總直徑減去初始直徑。最大耐受濃度(MTC)指不引起受試對(duì)象出現(xiàn)死亡的最高計(jì)量,即當(dāng)實(shí)驗(yàn)濃度處于最大耐受濃度時(shí),菌絲體有生長(zhǎng);而實(shí)驗(yàn)濃度高于MTC時(shí),則生長(zhǎng)被完全抑制。
1.2.5富硒粗毛纖孔菌菌絲硒含量的測(cè)定參考食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 5009.268-2016),采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS),精確稱取富硒粗毛纖孔菌菌絲干試樣0.5 g于聚四氟乙烯消解內(nèi)罐,加5 mL硝酸浸泡過(guò)夜。封好消解罐放入恒溫干燥箱,160℃保持6 h,自然冷卻至室溫后打開(kāi)加熱趕酸至近干,將消化液吸入25 mL容量瓶中,用少量1%硝酸溶液洗滌內(nèi)罐和內(nèi)蓋3次,合并洗液,用1%硝酸定容,混勻備用。將試樣溶液與空白溶液分別注入電感耦合等離子體質(zhì)譜儀中,測(cè)定硒元素含量。
1.3數(shù)據(jù)處理
利用DPS 7.05軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行隨機(jī)單因素方差分析,采用Tukey多重比較法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。利用Design-Expert 8.06軟件對(duì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)、分析并繪制響應(yīng)曲面。
2結(jié)果與分析
2.1單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1.1硒濃度對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響
由圖1可知,粗毛纖孔菌菌絲的生長(zhǎng)情況受外源硒影響較大。當(dāng)培養(yǎng)基中所添加硒濃度≤18.63 mg/L時(shí),粗毛纖孔菌菌絲的生長(zhǎng)速度與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。隨處理濃度的升高,當(dāng)硒濃度≥37.25 mg/L時(shí),粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)開(kāi)始受到明顯的抑制,其生長(zhǎng)速度顯著性降低(P<0.05)。當(dāng)硒濃度達(dá)到298 mg/L時(shí),粗毛纖孔菌菌絲略有生長(zhǎng),其生長(zhǎng)速度與零生長(zhǎng)組(即完全抑制組,硒濃度為596 mg/L)無(wú)顯著性差異(P>0.05)。因此,粗毛纖孔菌菌絲對(duì)硒的最大耐受濃度為298～596 mg/L,而后續(xù)實(shí)驗(yàn)中硒的濃度以18.63 mg/L為宜。
圖1硒濃度對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響
2.1.2常規(guī)培養(yǎng)料對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響
由圖2可知,粗毛纖孔菌菌絲在常規(guī)培養(yǎng)料配制的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng),但其菌絲生長(zhǎng)速度存在顯著性差異(P<0.05),且菌絲稠密度相差較大。粗毛纖孔菌在麩皮培養(yǎng)基上生長(zhǎng)效果最好,其菌絲的生長(zhǎng)速度可達(dá)到6.6 mm/d,且菌絲稠密度最高;其次為改良PDA培養(yǎng)基;以玉米粉、大米、豆粉為培養(yǎng)料時(shí),其菌絲生長(zhǎng)速度顯著降低(P<0.05),且菌絲稠密度明顯弱于改良PDA培養(yǎng)基。此外,粗毛纖孔菌菌絲對(duì)玉米粉的可利用度最低。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取麩皮為培養(yǎng)基。
圖2常規(guī)培養(yǎng)料對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響
注:菌絲的稠密度:+++:CK程度,++++:高于CK程度,++:低于CK程度,+:低于++程度;圖3、圖6同。
2.1.3補(bǔ)充碳源對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響如圖3所示,粗毛纖孔菌對(duì)不同補(bǔ)充碳源的可利用度不同,以不同類型的補(bǔ)充碳源作為培養(yǎng)基成分,其菌絲生長(zhǎng)速度存在顯著性差異(P<0.05),且菌絲稠密度相差較大。當(dāng)以葡萄糖作為補(bǔ)充碳源時(shí),粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度最高,菌絲稠密度最佳;以蔗糖、果糖、海藻糖作為補(bǔ)充碳源時(shí),其菌絲生長(zhǎng)速度稍低,菌絲稠密度則明顯弱于葡萄糖的效果。粗毛纖孔菌菌絲對(duì)乳糖的可利用度最低。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取葡萄糖作為補(bǔ)充碳源。
圖3補(bǔ)充碳源對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響
2.1.4 pH對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響由圖4可知,當(dāng)pH條件偏酸時(shí),該粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度偏低;當(dāng)pH處于6.5～7.5時(shí),該粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度先隨pH的增大而增加,再隨pH的增大而降低,于pH7.0時(shí)達(dá)到最佳,表明該粗毛纖孔菌菌株在中性pH條件下長(zhǎng)勢(shì)最好。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)中pH條件以7.0為宜。
圖4 pH對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響
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