Bact/Alert 3D血培養儀原理、報陽時間與生長曲線測定
目的觀察Bact/Alert 3D血培養儀報陽時間及生長曲線，幫助做出正確的血培養初級報告及預測細菌的類型。方法對本院656例成人血培養報陽時間及生長曲線進行分析。結果腸桿菌科的細菌、葡萄球菌、非發酵菌、鏈球菌和腸球菌、念珠菌及布魯菌報陽時間依次延長，生長曲線各有特點。結論根據各類細菌在Bact/Alert 3D血培養儀中報陽時間及生長曲線特點，幫助做出正確的血培養初級報告及預測細菌的類型，協助臨床醫生快速準確經驗用藥。
隨著血培養對臨床幫助越來越大，血培養送檢率也越來越高，但血培養結果回報太慢是臨床醫生對血培養滿意度最低之處。Bact/Alert 3D血培養儀報陽時間與生長曲線幫助微生物實驗室做出正確的血培養初級報告及預測細菌的類型，在一定程度上提高了醫生對血培養的滿意度。
材料與方法
1.1標本來源2014年1月-2015年12月期間我院在Bact/Alert 3D血培養儀上報陽656例血培養標本。
1.2儀器與試劑法國梅里埃Bact/Alert 3D血培養儀，成人中和抗生素需氧瓶；采用VITEK-2全自動微生物分析系統進行細菌鑒定和藥敏試驗。
1.3方法按臨床檢驗操作規程無菌采集左右手各8ml左右靜脈血注入成人中和抗生素需氧瓶中（由于沒有培養厭氧菌的能力與經濟條件，我院只能實行‘一側一中和抗生素需氧瓶’的方案），立即送至微生物室放入Bact/Alert 3D血培養儀進行培養。儀器報陽時，先查閱陽性瓶的報陽時間及生長曲線并做好記錄，接種轉種血平板和巧克力平板、麥康凱平板、沙堡弱平板，并做革蘭染色與濕片（看動力），出初級報告，如“檢出革蘭陽性球菌可能是葡萄球菌”或者“檢出革蘭陰性桿菌可能是腸桿菌科的細菌或者非發酵菌”、“檢出真菌孢子可能是念珠菌”。次日早上上班立即查看平板做快速、簡單的鑒定，出二級報告，同時快速配好菌液上VITEK-2細菌鑒定儀進行細菌鑒定和藥敏試驗，下午下班前就可以出最終報告。
2結果
2.1報陽時間656例報陽標本中，腸桿菌科的細菌262例，占40%；葡萄球菌223株，占34%；非發酵菌79株，占12%；鏈球菌52株，占8%；念珠菌20株，占3%；布魯菌7株，占1%；假陽性13株，占2%。其報陽時間見表1。
報陽時間656例報陽標本中，腸桿菌科的細菌262例，占40%；葡萄球菌223株，占34%；非發酵菌79株，占12%；鏈球菌52株，占8%；念珠菌20株，占3%；布魯菌7株，占1%；假陽性13株，占2%。其報陽時間見表1。
表1各類微生物報陽時間
2.2各類微生物在Bact/Alert 3D血培養儀上生長曲線特點見圖1、圖2。
圖1各類微生物的生長曲線
3討論
圖2用過抗生素的生長曲線
Bact/Alert 3D血培養儀原理是當培養瓶內有微生物生長，代謝過程中產生的二氧化碳可通過半透膜滲透至瓶底，與固定于瓶底的感應器結合，指示劑產生顏色變化，經光電檢測得知二氧化碳變化情況，自動連續記憶并且制成生長曲線圖，計算機接受此信息后，以加速度、起始值、速率三種方式來判斷陽性與否[1]。具體的程序是儀器每10min檢測瓶底顏色的變化，已測定二氧化碳的絕對濃度達到3300反射光度或加速度達到32反射光度每10min，系統判斷陽性[2]。由于血量、菌量、抗生素的使用及接種標本時間等因素都會影響血培養生長曲線，本文只能選擇典型的生長曲線進行分析，不是很全面。
腸桿菌科報陽時間最短，而生長曲線的遲緩期短，對數期十分迅速，平穩期極短，有時甚至看不到并且其二氧化碳的絕對濃度都在4000反射光度以上。其形成上述特點是由于此類細菌一般為兼性厭氧，在對營養條件要求不高，生長期短，細菌繁殖快，發酵葡萄糖產酸且產氣，二氧化碳產生速度快而量多[3]。這些報陽的腸桿菌科細菌中有一例特別的生長曲線見圖二，雖然這例五天報陽時間，但是其對數期十分迅速。出現這種生長曲線的原因是患者在抽血培養前就使用過抗生素。
葡萄球菌報陽速度僅次于腸桿菌科細菌，生長曲線有一定的傾斜，圖形的遲緩期、生長期、穩定期都明顯可見。其形成上述特點是因為葡萄球菌為需氧或兼性厭氧，雖其對營養要求不高，在肉湯中生長迅速，但對碳水化合物的發酵反應不規則分解葡萄糖產酸[4]，所以二氧化碳的生產量與速度都不如腸桿菌科細菌。
發酵菌報陽時間要長于葡萄球菌，生長曲線的遲緩期與穩定期比較平坦，形成一條典型的S線。其形成上述特點是由于非發酵菌一般為專性需氧菌，培養瓶由于加入血液等耗氧物質，影響細菌的生長環境，所以生長較為緩慢，其生長期較短，很快就進入穩定期；其不發酵糖類，雖能氧化葡萄糖，但產酸不產氣，導致二氧化碳的生產量與增加的速度不會有明顯變化，遲緩期與穩定期曲線因此較平坦[5]。
鏈球菌與腸球菌報陽時間與生長曲線相似，其報陽時間要長于非發酵菌，生長曲線的遲緩期與穩定期較平，生長期較陡。其形成上述特點是由于鏈球菌為需氧、微需氧或厭氧菌，營養要求高，在普通培養基不易生長，有些菌株還需要特殊的生長因子，對糖分解能力不定，導致其生長緩慢及二氧化碳的生長量少。腸球菌為需氧和兼性厭氧菌，對營養要求，分解糖類情況、生長速度與鏈球菌相似，所以其報陽時間與生長曲線與鏈球菌相似。這些報陽的鏈球菌中有一株肺炎鏈球菌很奇怪，培養液中菌株的革蘭染色總染成革蘭陰性球桿菌。有文章報道：肺炎鏈球菌在血培養報陽6h為革蘭陰性球桿狀[6]。這與肺炎鏈球菌自溶有關。
念珠菌的報陽時間要長于鏈球菌與腸球菌，整條生長曲線較圓滑，沒有突出的棱角。這可能與念珠菌的繁殖方式及分解糖類物質時生長二氧化碳的能力有關[7]。
布魯菌報陽時間最遲，大概在3d左右，生長曲線與非發酵菌相似，遲緩期與穩定期較平坦，對數期所對應的縱坐標較短。這與布魯菌對營養要求高，生長緩慢有關。如果遇到布魯菌此類的生長曲線，做好生物安全防護，因為其被認為潛在的生物恐怖病原菌，可以引起實驗室爆發感染[8，9]。
本次研究中有13例假陽性，出現假陽性的原因可能是：⑴血培養儀的外界溫度的變化；⑵電源電壓不穩定；⑶血培養瓶沒有常溫避光保存，長時間被陽光直射；⑷細胞本身也能發酵產生CO2，在抽血量超過推薦采血量或推薦采血量下含有大量的細胞(如白血病、真紅細胞增多癥等疾病)的情況下會導致假陽性的出現；⑸某些原因(如酸中毒、輸入大量液體)導致標本本身PH值偏酸性導致出現假陽性[10]。
通過觀察Bact/Alert 3D血培養儀報陽時間及生長曲線，可以幫助實驗室做正確的一級報告和預測可能的細菌類型，防止布魯菌感染實驗室工作人員，為臨床用藥提供更為及時、可靠的指導。