藜麥和藍靛果酵母菌株篩選、培養、計數及混菌液態發酵工藝優化（二）
1.2.3酵母菌篩選及發酵條件確定
1.2.3.1發酵菌種及時間選擇
以藜麥-藍靛果復合發酵液中SOD活力和活菌數為雙指標，在初始裝瓶量30 mL、pH5.0、接種量為0.20%條件下，接種BA、DE、YE和Sce菌液于藜麥-藍靛果復合清汁中，30℃下分別發酵8、16、24、32、40 h。
1.2.3.2接種量選擇
以藜麥-藍靛果復合發酵液中SOD活力和活菌數為雙指標，在初始裝瓶量30 mL、pH5.0條件下，接種0.15%、0.20%、0.25%、0.30%、0.35%酵母菌。
1.2.3.3裝瓶量選擇
以藜麥-藍靛果復合發酵液中SOD活力和活菌數為雙指標，在初始裝瓶量30 mL、pH5.0、接種量為0.20%條件下，100 mL錐形瓶中分別裝10、20、30、40、50 mL藜麥-藍靛果復合清汁后接種酵母菌，發酵16 h。
1.2.4活菌數的測定
酵母菌采用血球計數板法計數；乳酸菌采用平板法計數。
1.2.5 SOD活力的測定
按照超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒說明書方法測定。
1.2.6乳酸菌篩選及發酵條件確定
1.2.6.1乳酸菌生長曲線及產酸性能的測定
將乳酸菌在其最適條件下培養，每隔4 h取樣，使用酶標儀測量其OD值繪制生長曲線，使用精密pH計測定pH繪制產酸曲線。
1.2.6.2發酵菌種及時間選擇
以藜麥-藍靛果復合發酵液中活菌數和SOD活力為雙指標，在初始pH5.0、發酵溫度37℃條件下，接種量為3%的LA、LP、LR和S菌液于藜麥-藍靛果復合清汁中，37℃下分別發酵8、16、24、32、40 h。
1.2.6.3接種量選擇
以藜麥-藍靛果復合發酵液中SOD活力和活菌數為雙指標，在初始pH5.0、發酵溫度37℃條件下，分別接種1%、2%、3%、4%、5%菌液，L1、L2、L3發酵24 h、L4發酵16 h。
1.2.6.4復配比例選擇
以藜麥-藍靛果復合發酵液中SOD活力和活菌數為雙指標，在初始pH5.0、發酵溫度37℃條件下，將上述兩種最優乳酸菌按1:3、1:2、1:1、2:1、3:1比例接種，分別發酵24 h。
1.2.7復配菌種發酵藜麥-藍靛果復合發酵液工藝優化
1.2.7.1單因素實驗
藜麥-藍靛果復合清汁初始pH5.0，原料復配比例為1:1，添加6%白砂糖，滅菌后先接種0.02%酵母菌30℃預發酵16 h，再接種2%復配乳酸菌37℃發酵24 h，測定藜麥-藍靛果復合發酵液SOD活力和GABA含量。固定其它條件，分別考察初始pH（3.5、4.0、4.5、5.0、5.5）、發酵溫度（26.5、30.0、33.5、37.0、40.5℃）、原料復配比例（1:5、1:3、1:1、3:1、5:1）、白糖添加量（4%、6%、8%、10%、12%）對藜麥-藍靛果復合發酵液SOD活力、GABA含量的影響。
1.2.7.2響應面試驗設計
利用Design-Expert 10軟件中Box-Behnken模型，以藜麥-藍靛果復合發酵液SOD活力為響應值，進行白糖添加量、復配比例（藜麥清汁:藍靛果果汁）、接種量、發酵溫度4個單因素對藜麥-藍靛果復合發酵液SOD活力的響應面分析，優化發酵工藝參數。試驗因素水平如表1所示。
表1 Box-Behnken試驗設計因素及水平
1.2.8 GABA含量測定
參考湯彩云等的方法繪制標準曲線，藜麥-藍靛果復合發酵液的GABA質量濃度測定方法與標準品相同，將測得的吸光度值帶入標準曲線方程y=2.1796x+0.0553，R2=0.9995，求出GABA的質量濃度，即為藜麥-藍靛果復合發酵液的GABA含量。
1.3數據處理
所有試驗重復3次，采用SPSS 25進行單因素方差分析，P<0.05具有統計學意義，Design Expert 10中Box-Behnken模型進行響應面試驗設計及分析、GraphPad Prism 9軟件作圖。
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