?懸浮培養細胞生長曲線的繪制
懸浮培養細胞生長曲線的繪制
以三種不同細胞濃度進行系列細胞培養，每天計數細胞直至平臺期。
無菌
懸浮細胞培養
培養液，l00 ml
D-PBSA(細胞計數用）
24孔板
非無菌
裝培養板的塑料盒
CO2溫箱或5%C02以充盈塑料盒
懸浮細胞的傳代培養：
1.直接傳代法：
1)打開培養皿（瓶）蓋（蓋放在“非工作區”，蓋、培養皿口不能接觸任何物品）；
2)按照傳代比例加入適當體積的新鮮的完全培養基，小心吹打成細胞懸液，再按照傳代比例，等分裝入新的培養皿（瓶）中；
3)蓋好蓋子，混勻，放入37℃，5%CO2培養箱中培養。
2.離心傳代法：
1)打開培養皿（瓶）蓋（蓋放在“非工作區”，蓋、培養皿口不能接觸任何物品）；
2)將細胞懸液用移液槍或巴氏吸管吸至新的15mL離心管中；
3)1500rpm離心3min，棄上清，加入適當體積的新鮮的完全培養液，用吸管輕輕吹打成細胞懸液，按比例進行傳代，將細胞懸液分配至新的培養瓶（皿）中，補足完全培養液；
4)蓋上蓋子，混勻，放入37℃，5%CO2培養箱中培養；
3.收培養基、胰酶等，75%酒精擦拭操作臺面，關閉生物安全柜；
4.沖洗廢液缸。
操作步驟
1.如單層培養那樣（見方案21.8)將生長液中的細胞懸液以不同濃度加人到孔中。
2.以不同時間從三孔中取樣0.4 ml，注意細胞要充滿混勻以及完全分散成單個。
3.用電子細胞計數器汁數（見21.1.2節）或用血球計數器計數（見21.1.1節)。
4.計算每個樣本的細胞濃度，像單層細胞生長一樣以時間作對數線性作圖（見21.9.3節）。細胞密度不適用于懸浮培養，因為它們不會貼附。
提示接種2個75 cm2培養瓶，每瓶20 ml不同農度的細胞懸液。按需要每天從瓶中取0.4 ml，但取樣前要混勻細胞。培養瓶離開溫箱的時間要盡量短，在畫生長曲線期間不要換培養液。或者將培養瓶裝在振蕩器上（Techne，Integra，BeHco)，每天取樣。如果用振蕩培養瓶在一側瓶口封膜，則不用從溫室中取出培養瓶，也不用打開封口膜就可以取樣，將膜面擦凈，顛倒一下瓶子用注射器就可將液體吸出。
相關新聞推薦
1、鼠疫耶爾森氏菌在3種選擇培養基生長能力的測定——結果、結論
2、磷霉素鈉聯合臨床常用抗菌藥物對醫院感染中常見病原菌體外抗菌活性——摘要、材料與方法