龍腦在制備沙門氏菌鞭毛抑制劑中的醫(yī)用用途
龍腦(Borneol)，又名冰片、2-茨醇。是由菊科艾納香莖葉或樟科植物龍腦樟枝葉經(jīng)水蒸汽蒸餾并重結(jié)晶而得，無色或白色半透明六方形結(jié)晶體，具有類似樟腦的氣味。目前龍腦來源廣泛，根據(jù)提取原料的不同的，龍腦還分為左旋龍腦、右旋龍腦和消旋龍腦三種旋光異構(gòu)體。其天然產(chǎn)物同時還存在于薰衣草、迷迭香、艾葉等多種植物中，在植物揮發(fā)油中發(fā)揮重要的醫(yī)藥作用，還是我國傳統(tǒng)中藥艾葉揮發(fā)油中主要活性成分之一。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，龍腦具有抗菌、防止血栓的形成、協(xié)助藥物透過體內(nèi)屏障、陣痛抗炎抗癌和腦神經(jīng)保護等作用。近年來，大量文獻對龍腦的藥理活性進行了報道。但是，截止到目前國內(nèi)外尚無龍腦抑制沙門氏菌鞭毛的相關(guān)研究。
本文提出龍腦在制備沙門氏菌鞭毛抑制劑中的醫(yī)用用途，為防治沙門氏菌感染提供了新的研究思路和候選天然化合物。
沙門氏菌SL1344生長曲線
沙門氏菌SL1344接種于2mL LB培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)，次日按照1：100擴大培養(yǎng)至100mL錐形瓶繼續(xù)培養(yǎng)至OD600nm
＝0.3時，將菌液等量分裝至5個錐形瓶內(nèi)，每瓶分別加入龍腦使其終濃度分別為16、32、64、128μg/mL，同時設(shè)DMSO對照組，37℃，180rpm繼續(xù)培養(yǎng)，每隔1h測定細菌培養(yǎng)物OD600nm
值并記錄，直至細菌生長至平臺期，繪制生長曲線。
結(jié)果表明：在有效濃度范圍內(nèi)(16-128μg/mL)，龍腦均不影響沙門氏菌SL1344的生長(見附圖)。
龍腦抑制沙門氏菌SL1344對Caco-2細胞的粘附
將消化下的Caco-2細胞接種于24孔培養(yǎng)板中，用不含抗生素的DMEM培養(yǎng)基調(diào)整濃度為4×104
cells/孔，繼續(xù)置于37℃的含5％二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。沙門氏菌SL1344接種于2mL LB培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)，次日，按照1:20擴培至新鮮LB培養(yǎng)基，同時分別加入龍腦使其終濃度分別16、32、64、128μg/mL，并設(shè)置等體積DMSO對照。在37℃，180rpm繼續(xù)培養(yǎng)4h。調(diào)整菌液的濃度至4.0×106
CFUs/mL，備用。
移去24孔板中的培養(yǎng)基，加入上述準備好的菌液，1mL/孔。感染1h后，每孔加入1mL0.2％的TritonX-100，反復(fù)吹打。將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管，倍比稀釋，涂布于鏈霉素抗性LB固體培養(yǎng)基于37℃過夜培養(yǎng)，次日計數(shù)。
結(jié)果表明：龍腦(32-128μg/mL)處理能夠顯著抑制沙門氏菌SL1344對Caco-2細胞的粘附。
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