?4株金黃色葡萄球菌噬菌體形態(tài)、生物學(xué)特性、生長(zhǎng)曲線及基因組特征（二）
2、結(jié)果與討論
如圖1，本研究以金葡菌ATCC 29213為宿主菌，通過雙層平板法，從揚(yáng)州市內(nèi)污水樣品中分離得2株SA烈性噬菌體，分別命名為SAPYZU-04和SAPYZU-15。利用絲裂霉素C從已分離純化的金葡菌YZUsa13和YZUsa14中誘導(dǎo)出2株溫和噬菌體，分別命名為SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14。4株噬菌體的噬菌斑均呈圓形透亮、邊界清晰，直徑為0.8～1.5 mm。
圖1噬菌斑形態(tài)圖
2.1噬菌體的電鏡形態(tài)
通過透射電鏡觀察噬菌體微觀形態(tài)，結(jié)果如圖2所示。烈性噬菌體SAPYZU-04和SAPYZU-15均有一個(gè)呈正多面體結(jié)構(gòu)頭部和一個(gè)可伸縮的尾巴，頭部長(zhǎng)度分別約為64.96 nm和88.68 nm，尾部長(zhǎng)度約為165.03 nm和176.89 nm。而溫和噬菌體SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14均有一個(gè)呈橢球形頭部和一個(gè)不可伸縮的長(zhǎng)尾，頭部長(zhǎng)度分別約為長(zhǎng)直徑：84.26、71.82 nm和短直徑：44.73、47.71 nm，尾部長(zhǎng)度約為254.43 nm和266.17 nm。結(jié)果顯示烈性噬菌體SAPYZU-04和SAPYZU-15的顯微形態(tài)與黨瑞瑩等、張志宏等和涂尊方等的研究一致；而溫和噬菌體SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14的電鏡形態(tài)與Zhang等、Yang等和Feng等的研究結(jié)果一致。
圖2噬菌體的形態(tài)
2.2裂解譜
應(yīng)用空斑法測(cè)試噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14對(duì)51株金葡菌菌株YZUsa1-YZUsa47、ATCC 29213、MRSA 85/2082、MRSA JCSC4744、MRSA WZ153和5株其他菌屬菌株的裂解特性，結(jié)果如表1所示。烈性噬菌體SAPYZU-04和SAPYZU-15均能裂解51株金葡菌，裂解率為100%，并且噬菌斑較透亮，+++數(shù)量均達(dá)到56%；而噬菌體SAPYZU-SapM13能裂解48株SA菌株，裂解率為94%，噬菌體SAPYZU-SapM14能裂解44株SA菌株，裂解率為86%。然而，這4株噬菌體對(duì)于單核增生性李斯特菌ATCC 1911、腸炎沙門氏菌CICC 21513、大腸桿菌CICC 10664、最小弧菌CICC21613以及霍氏腸桿菌Eh-YZU05均沒有裂解能力。4株噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14均比王一帆等（1/11，9%）、Yang等（13/30，43%）、黨瑞瑩等（23/63，36%）、Feng等（61/138，44%）和張志宏等（10/37，27%）分離的噬菌體的裂解譜更寬。噬菌體較寬的宿主譜是其用于生物防治的重要特性，因此，噬菌體裂解譜的測(cè)定對(duì)于選擇應(yīng)用于食品中的生物抑菌劑至關(guān)重要。此外，溫和噬菌體SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14在進(jìn)行宿主譜測(cè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)他們的溶原菌仍有裂解作用，該結(jié)果與Zhang等和Feng等的研究一致。研究表明一些噬菌體裂解宿主菌是一種“從外裂解”的過程，這個(gè)過程是高濃度噬菌體吸附宿主菌后快速破壞宿主細(xì)菌細(xì)胞。因此，本研究的溫和噬菌體SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14進(jìn)行宿主譜測(cè)定時(shí)濃度遠(yuǎn)大于宿主細(xì)菌細(xì)胞是其顯示裂解特性的原因之一。
表1噬菌體的宿主譜
2.3最佳MOI
用不同MOI比例的噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14感染宿主菌，培養(yǎng)8 h后測(cè)定噬菌體效價(jià)。如圖3所示，噬菌體SAPYZU-04在MOI為0.01（P＜0.05）時(shí)，效價(jià)最高（約為109PFU/mL）；噬菌體SAPYZU-15在MOI為0.000 1時(shí)，效價(jià)最高（約為1010PFU/mL）；噬菌體SAPYZU-SapM13在MOI為0.1時(shí)，效價(jià)最高（約為1010PFU/mL）；噬菌體SAPYZU-SapM14在MOI為0.01（P＜0.01）時(shí)，效價(jià)最高（約為109PFU/mL）。因此，噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14的最佳MOI分別為0.01、0.000 1、0.1和0.01。
圖3噬菌體最佳MOI測(cè)定結(jié)果
圖4噬菌體的熱穩(wěn)定性
2.4噬菌體的熱穩(wěn)定性
如圖4所示，金黃色葡萄球菌噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14在40℃和50℃條件下作用1 h效價(jià)基本不變，效價(jià)分別為5.63×107、1.34×109、1.12×109和1.27×1010PFU/mL；在60℃條件下隨著作用時(shí)間越長(zhǎng)，噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14效價(jià)越低。分別在70℃孵育40、20和20 min時(shí)，噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15和SAPYZU-SapM14完全失活，而噬菌體SAPYZU-SapM13在70℃孵育60 min時(shí)完全失活。結(jié)果表明4株噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14對(duì)高溫的耐受能力均強(qiáng)于Kraushaar等報(bào)道的金葡菌噬菌體。
2.5噬菌體的耐酸堿能力
如圖5所示，噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14在酸度較高的環(huán)境（pH值為2）中會(huì)完全失活；在pH值為3～12時(shí)活性較穩(wěn)定。在pH值為5時(shí)，噬菌體SAPYZU-04的效價(jià)最高為1.31×107PFU/mL（P＜0.05）；pH值為9時(shí)，噬菌體SAPYZU-15的效價(jià)最高為8.94×106PFU/mL；而噬菌體SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14在pH值為8時(shí)效價(jià)最高，分別為9.18×107PFU/mL和9.52×107PFU/mL。結(jié)果表明噬菌體SAPYZU-04、SAPYZU-15、SAPYZU-SapM13和SAPYZU-SapM14在pH值為3～12范圍內(nèi)均保持良好活性，其對(duì)酸堿的耐受能力均強(qiáng)于盧瑋等分離的金葡菌噬菌體（pH值為6～11范圍內(nèi)穩(wěn)定）。
圖5噬菌體的耐酸堿能力
4株金黃色葡萄球菌噬菌體形態(tài)、生物學(xué)特性、生長(zhǎng)曲線及基因組特征（一）
4株金黃色葡萄球菌噬菌體形態(tài)、生物學(xué)特性、生長(zhǎng)曲線及基因組特征（二）
4株金黃色葡萄球菌噬菌體形態(tài)、生物學(xué)特性、生長(zhǎng)曲線及基因組特征（三）
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