生活飲用水菌落總數測定方法及影響因素（一）
摘要：菌落總數是評價水質污染程度的主要衛生指標,因此對菌落總數檢測的質量控制就顯得尤為重要。就目前而言,菌落總數的數據質控始終沒有一個統一的標準,并且根據菌落數量的多少會有所不同。根據實際工作的特點,對引起菌落總數檢測結果誤差的因素進行分析討論,并提出相應的控制措施。
一、材料與方法
1.樣品來源
美國IDEXX菌落總數質控樣品、濰坊市中心城區管網末梢水及濰坊市峽山水庫地表水。
2.檢測方法
依據《生活飲用水標準檢驗方法微生物指標》（GB/T 5750.12—2006）中的平皿計數法進行實驗分析，培養基采用北京奧博星生物科技有限責任公司生產的營養瓊脂，批號為20140102，并在有效期內使用。
二、結果與分析
在水質菌落總數檢測過程中，對檢測結果引起誤差的因素主要有培養基、重復性、檢測時間、培養時間、培養溫度、傾注平板時培養基溫度、同一稀釋度平行平板讀數、不同稀釋度平行平板讀數、不同實驗人員對同一水樣菌落總數的讀數等。結合山東省濰坊市水質的特點，主要討論培養基、檢測時間、培養時間、平行平板重復性、不同人員對同一平板讀數等5個因素。
1.培養基對檢測結果的影響及控制措施
培養基是微生物賴以生存的生命之本，培養基制備直接影響著微生物的生長，進而影響了檢測結果。因此，應嚴格按照培養基的配方及說明認真制備培養基，每批培養基在使用前都要進行符合性驗證，主要包括陽性對照及無菌試驗。本實驗采用大腸埃希氏菌（ATCC25922）進行劃線培養，計算生長指數G，結果為G=13（G≥6時培養基可以接受），并且經空白測定證明無菌。因此，本批次培養基可以進行菌落總數的測定。
2.檢測時間對菌落總數結果的影響
國家標準規定微生物水樣保存時間為4 h，但是在實際工作中有時候因采樣地點路程較遠等因素，不能在4 h內完成檢測。將質控菌片溶解后立即檢測，經4℃冷藏存放2 h、4 h、6 h、8 h、23 h、24 h、30 h、48 h、72 h后分別檢測，結果如圖1所示。
從圖1可以看出，對質控菌片用無菌生理鹽水溶解后立即檢測、間隔2 h到23 h后檢測，菌落總數結果變化不明顯，均在20 CFU/mL左右，符合真值20 CFU/mL；從24 h開始，數值呈現較大的變化趨勢，并逐漸超出質控樣可接受范圍（2～38 CFU/mL）。由此可見，檢測時間對菌落總數結果可靠性影響較大，由于細菌的繁殖隨時間呈幾何級數增長，在室溫條件下存放水樣更會導致細菌的繁殖，因此微生物水樣必須在4℃冷藏，取來后應立即檢測，最長不宜超過24 h。
3.培養時間對菌落總數結果的影響
分別對菌落總數質控樣品和含菌量較高的水樣品進行菌落總數檢測，不同的培養時間對菌落總數的影響呈現一定的變化趨勢，具體如圖2所示。
從圖2可以看出，細菌種類單一的質控樣品培養在24 h～48 h～72 h之間，結果沒有發生較大的變化，在平板計數時只是菌落大小隨時間增長有所增大，數量變化不大。然而，含菌量較高的水樣品，細菌種類較復雜，隨著培養時間的延長，變化趨勢比較明顯。培養24 h時菌落總數小于200 CFU/mL，在24 h～46 h間結果逐漸上升，在46 h～50 h間菌落總數基本沒有發生變化，從70 h開始菌落總數明顯增高。因此，在日常水樣檢測中，培養時間是影響結果準確的主要因素之一，應規范操作，將培養時間控制在48±2 h為宜。
4.不同檢測人員對同一菌落讀數結果的影響
采用7位檢測員對同一平板進行菌落計數，并對結果進行統計，計算平均值、誤差率以及可接受區間，具體結果見表1。
表1 7位實驗人員對同一平板計數的結果
從表1中可以看出，7位實驗人員的計數結果均在可接受范圍之內，與均值誤差率小于5%，最大值與最小值誤差為8.86%，滿足不同人員對同一平板計數誤差小于18.2%的北歐標準。因此，就本實驗室而言，不同人員對同一平板讀數引起的誤差較小，在實際工作中可以作為次要因素考慮。
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